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人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞(NK-92)說明書
更新時間:2019-01-08 點擊量:2644

    人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞(NK-92)

貨號:HIMCL-060

 

細胞介紹

NK-92是從一位患有急進性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細胞衍生來的一株白細胞介素-2依賴型NK細胞株。這株細胞對很多惡性細胞有細胞毒性;鉻釋放試驗顯示它能殺死K562和Daudi細胞。NK-92細胞(經過照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的體外免疫清掃而不危及血細胞的功能。NK-92細胞有以下特征: CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54表面標記陽性,CD56亮;CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20, CD23, CD34和HLA-DR表面標記陰性。

 

細胞特性

1) 來源:惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞

2) 形態淋巴母細胞

3) 含量:>1x106 個/mL

4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規格:T75瓶或者1mL凍存管包裝

 

運輸和保存:使用含有胎牛血清的2ml凍存管發送存活細胞。收到細胞后,1000RPM,常溫條件離心5min后潔凈操作臺棄去上清,加入推薦使用的培養基轉移至10cm培養皿或者T75培養瓶中培養傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

 

細胞用途:僅供科研使用。

                       

細胞培養步驟

一.培養基培養凍存條件準備:

1) 準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),75%;添加0.2mM肌醇,0.1mM β-Me,0.02mM葉酸,100U IL-2,馬血清12.5%,胎牛血清,12.5%

2) 培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度培養箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液90%*培養基,10%DMSO現用液氮儲存。

二. 細胞處理

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中加入8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%可進行傳代培養

對于懸浮細胞傳代可參考以下方法:

方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中

方法二:可選擇半數換液方式,棄去半數培養基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中

3)細胞凍存:細胞生長狀態良好時,進行細胞凍存。懸浮細胞凍存時,應將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細胞吸走)加入部分新鮮培養基,加入到凍存管中,凍存管中加入10%DMSO進行凍存。

 

注意事項:

1. 收到細胞后,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系

2. 所有動物細胞均視為潛在的生物危害性必須在二級生物安全內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

 

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