日本午夜啪啪丨亚洲老子午夜电影理论丨亚洲人成网站18禁止中文字幕丨国产永久久丨中文无码天天av天天爽丨伊人情人色综合网站丨日韩亚洲一区二区丨色爱av丨成人免费毛片明星色大师丨亚洲一区二区免费看丨日韩女优网站丨5151精品国产人成在线观看丨私人成片免费观看丨爱情岛成人18丨四十如虎的丰满熟妇啪啪丨日韩不卡1卡2卡三卡2021免费丨亚洲永久网站丨夜夜嗨网站丨超碰人人搞丨内射中出无码护士在线丨午夜性刺激在线视频免费丨日本精品成人一区二区三区视频丨91porny九色丨麻豆精品丨国产mv欧美mv日产mv免费

細胞培養的基本知識

操作前準備工作：

1.玻璃吸管和玻璃培養瓶的消毒：1)高壓蒸汽滅菌15分鐘以上；2)干烤消毒140度2小時以上；

2.無菌工作臺先清洗后用75%酒精擦拭干凈，紫外線照射40分鐘以上；各種培養板照射3小時以上；

3.培養基(pH7.2)和血清配制好后要做無菌試驗：將血清按10%加入培養基內，用無菌的玻璃離心管或玻璃瓶取完全培養基5-10ml置培養箱內培養2-3天，肉眼見無渾濁或沉淀等異物。分裝后置-20度保存；

4.消化液(pH7.8)或其它加入液，應用高壓蒸汽滅菌或一次性無菌濾器過濾除菌，分裝成支置-20度保存；

5.各種凍存的液體復溫時應邊搖邊融化，否則有的液體（特別是培養基）容易產生沉淀；

6.培養箱應先用清水清洗后用75%酒精擦拭一遍（如有紫外線的應照射1小時以上，如有高溫滅菌的應按程序來菌）至少每月一次；

7.進入操作時應注意先清洗雙手及手腕，然后用75%酒精擦拭，操作時注意無菌臺內空間層次。手及物品不要在暴露的瓶口上方來往，如果數量較多，培養瓶應放在與酒精燈平行地方便于操作，瓶與瓶之間應相隔一定的距離，開瓶（蓋）時應先用75%酒精反復擦拭或用燈燒，開開后應用燈先燒口，然后燒蓋用完后同樣操作，整個操作過程盡量在無菌臺靠里面一點。

復蘇：

1.應遵守慢凍快融的原則，先將水溫鍋調至37-37.5度，取出凍存的細胞迅速放入后交細胞面浸至水面以下不斷搖動至融化；

2.在無菌臺內將完全培養基加入50ml的小培養瓶內，約5ml左右，然后用無菌吸管從凍存管內取出細胞，置培養并內輕輕搖晃，使細胞均勻后置培養箱內培養。

傳代：

1.貼壁細胞：

對于貼壁細胞應先吸（倒）盡培養基，吸的越干凈越好，以免中和后加入的消化液，使強度減弱，50ml培養瓶加入消化液約0.6ml，按此比例進行消化，（根據配制強度經驗），晃動使消化液鋪均勻置37度培養箱約2分鐘，鏡下見細胞收縮變圓或少數脫落后，輕輕振動瓶底使細胞全部脫落，加入2-3ml完全培養基后，輕輕吹打，使細胞基本成單個懸浮，然后分置其它無菌培養瓶內，加入完全培養基后繼續培養或實驗。

2.懸浮細胞：

一般傳代可直接將細胞原液分置其它培養瓶內，加入完全培養基繼續培養，如要高濃度可先離心500rpm，5min后加入完全培養基，輕輕吹勻后，分置其它培養瓶內加入完全培養基繼續培養。

無菌操作：

簡要介紹：

1.將試驗用品放入超凈工作臺用紫外線照射30分鐘；2. 照射30分鐘后，進入緩沖間，換滅菌的無菌衣，換專用拖鞋；3.手部用5％的潔爾滅浸泡2分鐘，進入潔凈區后，用75％的酒精棉球再次擦拭裸露的手部。4.最好戴口罩；5.操作時盡量靠近火焰；6.裝培養基的瓶子等不要直接口向上，用一個架子斜放，瓶口朝向火焰；7.標準操作，不要讓無菌吸管到處碰來碰去；8.中途出入無菌室，再次操作時，一定要再次用75％的酒精棉球消毒。

活細胞計數：

1、先消化吹打使細胞盡量變成單細胞懸液；

2、取出細胞液按你的濃度加入臺盼蘭置室溫5分鐘左右；

3、準備好潔凈的計數板及蓋玻片放在一旁，用玻璃滴管吸取染好并輕輕吹勻的細胞液，將滴管尖端輕輕靠在蓋玻與計數板的縫隙間，微微捏一下滴管膠頭細胞自動就被吸到計數板里了（捏重了細胞不均勻，計數不準，細胞還會流出）。

4、在鏡下計數。

四角的4個大方格內細胞總數÷4×10000=你滴入時細胞液每ml的細胞數。

從2011年開始我們致力于在生命科學領域、生物醫學實驗技術及論文潤色服務，協助客戶各類實驗服務及論文潤色十余年，是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究，歡迎您與我們聯系。

實驗技術服務：